جداسازی،خالص سازی و تعیین ویژگی های بیوشیمیایی آنزیم پروتئاز از فلور قارچی خاک چرم شهر- مشهد

در این مطالعه، قارچ aspergillus oryzae ch93 از فلور خاکی شناسایی شده و به وسیله میکروسکوپ الکترونی sem و آزمایشات مولکولی مورد بررسی قرار گرفت. برای استخراج پروتئاز، گونه قارچی در دمای 28 درجه سانتی گراد و 6 ph = و در حضور گلوگز و عصاره مخمر 1% برای 96 ساعت رشد داده شد. یک پروتئاز 5/47 کیلودالتونی از a. oryzae ch93 به کمک رسوب با آمونیوم سولفات و ستون کروماتوگرافی q- sepharose تخلیص شد. ph و دمای بهینه آنزیم به ترتیب 8 و 50 درجه سانتی گراد به دست آمد. سدیم-دودسیل سولفات (sds)، ستیل تری متیل آمونیوم بروماید ctab)) و هیدروژن پراکسید (h2o2) باعث کاهش فعالیت آنزیم شدند، درحالی که triton x-100 و فنیل متیل سولفونیل فلوئوراید (pmsf) اثر مهاری بر روی آنزیم نداشتند. از طرف دیگر، 2- مرکاپتواتانول و اتیلن دیامین تترا استیک اسید (edta) باعث کاهش فعالیت پروتئاز شدند. ایزوآمیل الکل و استون (در غلظت 30%) باعث افزایش فعالیت پروتئازی و 2- پروپانول و ایزوپروپانول و دی متیل سولفوکساید (در غلظت 30%) باعث کاهش فعالیت آنزیم شدند. نیمه عمر آنزیم در دمای بهینه ی آن، 100 دقیقه، به دست آمد. فعالیت پروتئازی در حضور پنج سوبسترای سرم آلبومین گاوی (bsa)، n- استیلl- تیروزین اتیل استر مونوهیدرات (atee)، آزوکازئین، کازئین و ژلاتین بررسی شد که نشان داد بهترین سوبسترا کازئین می باشد. حداکثر سرعت آنزیم و ثابت میکائیلیس- منتن برای پروتئاز به ترتیب µg/min 208 و µg/ml 64/2 به دست آمد. در نتیجه پروتئاز استخراجی از a. oryzae ch93 به عنوان یک پروتئاز با منبع قارچی، ویژگی‏های بیوشیمیایی ای را داراست که می تواند در کاربردهای عمومی مفید باشد.